凝膠色譜是以多孔凝膠為固定相，利用凝膠孔的空間尺寸效應(yīng)，使不同大小的分子達(dá)到分離的一種高效液相色譜（HPLC）方法。其分離機(jī)理類似于分子篩效應(yīng)，大體積分子只能滲入少量大孔，在固定相中所經(jīng)歷的路徑較短，先流出。所有孔隙都不能進(jìn)入的大體積分子，不被保留，在死體積處流出。因此，溶質(zhì)按分子體積從大到小依次流出色譜柱。在凝膠色譜中，流動相只起溶解樣品的作用，以有機(jī)溶劑為流動相的凝膠滲透色譜（GPC）應(yīng)用較多，而以水為流動相的凝膠過濾色譜的應(yīng)用相對較少，這主要是因為水溶性大分子不僅可以溶于水，通常也能溶于有機(jī)溶劑中。甲苯和二甲基甲酰胺等非極性有機(jī)溶劑是常用的流動相。在凝膠色譜中，固定相表面與溶質(zhì)分子間不存在化學(xué)相互作用，即固定相是惰性多孔材料。
gpc凝膠凈化是凝膠滲透色譜主要應(yīng)用的一種，是樣品前處理的一種方法。
gpc凝膠凈化是一種以惰性多孔凝膠為固定相，基于尺寸排阻原理，主要依據(jù)分子尺寸大小差異使物質(zhì)分離的一種高效液相色譜方法。
gpc凝膠凈化的分離原理：
一個含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠色譜柱時，各分子在柱內(nèi)同時進(jìn)行著兩種不同的運動：垂直向下的移動和無定向的擴(kuò)散運動。
大分子物質(zhì)由于直徑較大，不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔，而只能分布顆粒之間，所以在洗脫時向下移動的速度較快。
小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴(kuò)散外，還可以進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，即進(jìn)入凝膠相內(nèi)，在向下移動的過程中，從一個凝膠內(nèi)擴(kuò)散到顆粒間隙后再進(jìn)入另一凝膠顆粒，如此不斷地進(jìn)入和擴(kuò)散，小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì)，從而使樣品中分子大的先流出色譜柱，中等分子的后流出，分子小的后流出。
